Nuova pagina 3

Questo sito web tratta in termini generali la gestione clinica, la diagnosi, le opzioni di trattamento della malattia e la consulenza genetica. Le informazioni qui contenute non possono in alcun modo essere sostitutive di una consulenza medica per il singolo paziente o famiglia.

Per una diagnosi certa di NBS sono necessari, oltre al riconoscimento del quadro clinico caratteristico, specifici esami di laboratorio.

L'età media alla diagnosi è di 7 anni circa e una malattia neoplastica insorge prima della diagnosi nel 20-30% dei pazienti. Questa situazione è estremamente pericolosa poiché, a causa della loro elevata radiosensibilità, i pazienti NBS sono a rischio di sviluppare gravi complicanze tossiche (anche la morte) e/o neoplasie secondarie quando trattati con protocolli convenzionali di radio- e chemioterapia. Ciò implica che:

Microcefalia. Quando una microcefalia severa (OFC inferiore al 3° percentile) da causa non nota è presente alla nascita o insorge durante i primi mesi di vita, la diagnosi di NBS deve essere considerata. Nella NBS la microcefalia è accompagnata da un aspetto peculiare del viso, con fronte sfuggente all'indietro, retrognazia e prominenza della regione malare; queste dismorfie diventano più evidenti con l'età. Altri segni clinici associati posso indirizzare la diagnosi differenziale tra la NBS e altre forme di microcefalia.

Quando la microcefalia è associata a
ipoplasia dei lobi frontali agenesia della porzione posteriore del corpo calloso	malformazioni cerebrali gravi
normale sviluppo neuromotorio nel primo anno di vita	ritardo psicomotorio severo
	epilessia grave con insorgenza nella prima infanzia
NBS	altre forme di microcefalia

Va sottolineato che anche se malformazioni cerebrali gravi, ritardo psicomotorio severo ed epilessia grave con insorgenza nella prima infanzia non sembrano essere associati alla NBS e suggeriscono una diagnosi diversa, la loro presenza non è un criterio sufficiente ad escludere la diagnosi di NBS.

Nei casi di sospetta NBS l'utilizzo di radiazioni ionizzanti a scopo diagnostico (es. TC dell'encefalo), se non strettamente necessario, deve essere evitato.

Infezioni respiratorie ricorrenti. Le infezioni respiratorie ricorrenti possono essere il sintomo più evidente della NBS, precedendo il riscontro di laboratorio dell'immunodeficienza ed essendo presenti nel 30-40% dei pazienti al momento della diagnosi.

La valutazione del profilo immunologico nella NBS dovrebbe includere:

- classi e sottoclassi delle immunoglobuline

- sottopopolazioni linfocitarie B e T (CD19+, CD20+, CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+, CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+, CD16+, CD56+)

- risposta proliferativa in vitro dei linfociti T ai mitogeni/antigeni (es. PHA, anti-CD3, anti-TCR)

I difetti più comuni nella NBS sono: deficienza combinata di IgG e IgA con livelli normali di IgM, bassi livelli di IgG2 e IgG4, un numero ridotto di linfociti T CD3+ con bassi valori di cellule CD4+ e rapporto CD4+/CD8+ diminuito, numero aumentato di cellule NK e risposta proliferativa in vitro dei linfociti T ai mitogeni notevolmente ridotta. Deve essere ricordato che nella NBS il deterioramento del sistema immunitario è spesso progressivo e che pazienti molto giovani possono mostrare parametri immunologici completamente normali. Da qui la necessità, nei casi di sospetta NBS, di monitorare periodicamente la funzionalità immunitaria.

Malattie linfoproliferative. La patologia linfoproliferativa, in particolare i linfomi non-Hodgkin a cellule B (B-NHL) e la leucemia linfoblastica acuta (ALL), possono essere il segno clinico che porta all'identificazione della malattia.

La diagnosi di NBS dovrebbe essere attentamente considerata prima dell'inizio della radio- chemioterapia nei pazienti con patologia linfoproliferativa:

- di età molto giovane (inferiore ai 3 anni)

- che mostrino in associazione difetti congeniti o di sviluppo

La presenza di una malattia con instabilità cromosomica, compresa la NBS, deve essere inoltre sospettata in ogni paziente che sviluppi gravi effetti collaterali dopo somministrazione di radio- chemioterapia.

Quando, sulla base dell'esame del fenotipo clinico, si sospetti la diagnosi di NBS, l'analisi citogenetica consente l'identificazione dell'instabilità cromosomica sia spontanea che radio-indotta e quindi una conferma della diagnosi.
Per l'analisi dell'instabilità cromosomica spontanea, i preparati sono ottenuti da colture di linfociti del sangue periferico. Almeno 100 metafasi dovrebbero essere analizzate per valutare la presenza sia di rotture cromosomiche e cromatidiche (colorazione Giemsa) che di riarrangiamenti (bandeggio QFQ). La frequenza di metafasi con anomalie e il numero totale di rotture e riarrangiamenti può essere confrontato con la frequenza di aberrazioni osservata in controlli di pari età. Per migliorare la qualità dell'analisi è opportuno che ciascun laboratorio possegga i propri controlli.
La ridotta risposta proliferativa dei linfociti T ai mitogeni può in alcuni casi pregiudicare l'analisi cromosomica.
Sia su linee linfoblastoidi che su colture di fibroblasti la radiosensibilità può essere valutata contando (su 100 metafasi colorate con Giemsa) il numero di aberrazioni di tipo cromatidico indotte dopo esposizione a basse dosi di radiazioni nella fase G2 del ciclo cellulare. La frequenza di rotture cromatidiche indotte è più alta nelle cellule NBS che nelle linee cellulari di controllo e consente di distinguere chiaramente le cellule NBS da quelle sane.

L'analisi mediante Western blotting con anticorpi policlonali diretti contro la nibrina può confermare la diagnosi di NBS, dimostrando la mancata espressione di p95 nelle linee linfoblastoidi (LCL).
Nelle LCL NBS il test di co-immunoprecipitazione con anticorpi policlonali diretti contro Nbs1 consente l'identificazione di segmenti polipeptidici C-terminali di Nbs1 che mantengono la capacità di interagire con hMre11. Alleli con mutazioni diverse del gene NBS1 sintetizzano proteine C-terminali con differente peso molecolare, la cui identificazione consente una stima della localizzazione della/e mutazione/i all'interno del gene NBS1.

Recentemente la mutazione missenso R215W (643C>T) è stata trovata allo stato eterozigote composto con la mutazione classica 657del5 in due gemelli monozigoti che, nonostante presentassero una forma clinicamente severa di NBS, non mostravano instabilità cromosomica (spontanea e indotta). Nibrina di normale peso molecolare era presente nelle linee cellulari linfoblastoidi dei pazienti, ma con espressione ridotta. Vedi anche Descrizione della Malattia (Fenotipo Clinico, Citogenetica e Fenotipo Cellulare, Biologia Molecolare).

L'analisi molecolare consente la conferma definitiva della diagnosi, con la dimostrazione di mutazioni patogenetiche in entrambi gli alleli del gene NBS1. Tutte le mutazioni fino ad ora identificate sono localizzate all'interno degli esoni 6-10 e tutte tranne una risultano in prematuri codoni di stop e di conseguenza nell'arresto della sintesi della nibrina. Ci si attende che i pazienti di origine slava siano omozigoti per la mutazione 657del5, mentre nove mutazioni diverse sono state identificate in pazienti di differenti gruppi etnici, due dei quali italiani. Non è stata fino ad oggi riconosciuta una correlazione genotipo-fenotipo clinico.

Vai alla pagina Come contattarci se ti serve aiuto per la diagnosi di NBS e fai click sull'icona qui sotto per scaricare la tua copia dell'opuscolo sulla diagnosi di NBS per i pediatri e i medici di base (file *.pdf).